怎么确保细胞在培养箱内健康生长

   日期:2019-04-22     来源:中国仪器网    作者:仪器信息网    浏览:1849    评论:0    
核心提示:细胞培养箱是提供稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。细胞培养时,细胞可能会出现

细胞培养箱是提供稳定的温度(37°C)、稳定的CO2水平(5%)、恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、较高的相对饱和湿度(95%),来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。细胞培养时,细胞可能会出现死亡的现象,那么就让小编带你了解一下细胞培养时应该注意哪些问题,以确保细胞在培养箱内健康的成长。

1.保证实验材料无菌

由于细胞培养箱内温暖潮湿,是真菌生长的良好环境,所以必须定期的对细胞培养箱进行清洁。除此之外,应该先用酒精擦拭干净培养瓶,移液管和其他相关的物品后,再将它们放入到超净台,防止污染。

2.处理培养物时要小心

温度不断的波动或者剧烈的摇晃都会严重影响细胞的生长。所以培养箱最好要温度恒定,不晃动,放在离电动仪器较远的地方。除此之外,一次处理多个细胞系可能会对细胞的表型和基因型产生影响,所以应该尽量避免。为了确定细胞系的身份,还需要定期完成STR图谱的分析。

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3.正确解冻细胞

虽然解冻的操作步骤很简单,还是需要恰当的操作,防止细胞受到伤害。细胞不能够长时间暴露在高温的条件下。所以为了防止对DMSO直接造成伤害,应该先把冻存管放在37度的水浴中两分钟,然后再用条件培养基稀释。

4.使用对数生长期的细胞

细胞的培养过程总共分为停滞期,对数期和平台期三个阶段,这三个阶段分别代表了低细胞生长,高细胞生长和无细胞生长。细胞越有活力,细胞就越健康,分裂也就越快,在对数期以百分之七十到八十的汇合度存在。

5.传代前,不能让细胞完全汇合

贴壁细胞所占培养瓶表面积的百分比被称为汇合度。完全汇合表面贴壁细胞百分百的占据了培养瓶的表面。如果细胞呈现完全汇合状态,那么就表面细胞不能够生长。所以要使用有活力的细胞。

6.选择良好的培养基

在细胞培养过程中,培养基影响着产品的质量,产量和成本。为了更好的实验结果,需要对每一种培养物进行培养基定制。

7.配置干粉培养基时要注意水的质量

比起干粉培养,液体培养常常会获得质量更高的结果。这或许与水的质量有关。

8.利用细胞代谢特性优化培养基

对使用过的培养基进行分析,对于鉴定必要成分(包括氨基酸和维生素)的代谢速率很有帮助。

9.避免细胞过度消化

为了实现贴壁细胞的传代,需要通过胰蛋白酶消化使细胞和容器结合的蛋白质。但是,细胞不能在胰蛋白酶中太长时间,否则胰蛋白酶会消化细胞表面的蛋白。

10.培养基不能持续使用抗生素

细胞培养物不能长时间在抗生素中,否则会出现对抗生素有着天然耐药性的菌株出现,潜在的污染可能会被掩盖在这种现象里。


 
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